白絹病 灰黴病 炭疽病 疫病 鐮胞菌感染 細菌性軟腐病 褐斑病 石斛蘭葉斑病 毒素病(Virus) | 毒素病(Virus) •簡介: 據農試所調查報告顯示本省蘭科植物感染的病毒主要以「東亞蘭嵌紋病毒(CyMV)」「齒舌蘭輪斑病毒(ORSV)」這兩種病毒經常複合感染為害(「胡瓜嵌紋病毒-CMV」目前僅在蝴蝶蘭少數發生),在本省蘭園中分布非常普遍,蘭株受害後,葉片通常出現系統性的退色斑塊或條斑,嚴重時造成葉片壞疽,對蘭花的生長與觀賞品質都有非常不利的影響。 •傳播途徑: 病毒病是系統性病害,因此,無性繁殖是傳播本病最重要的途徑,此外ORSV及CyMV也可藉由接觸而傳播,這二種病毒都極為穩定,有報告指出,甚至連栽培質材與灌溉用水都可能是傳播媒介,但到現在還未發現可以傳播這二種病毒的媒介昆蟲。 東亞蘭嵌紋病毒 (Cymbidium mosaic virus) ▲TOP •簡稱:CyMV •病徵: CyMV 感染之蘭株經常有產生壞疽型病徵之傾向,如黑色壞疽斑點 (spots)、壞疽條紋 (line patterns) 等,產生之部位除葉部、莖部外,花部壞疽也是CyMV特有之病徵。最常見之例子是報歲蘭、嘉德麗亞蘭、文心蘭、虎頭蘭、萬代蘭及蝴蝶蘭。壞疽斑有時只出現於葉片下表面,而不發生於上表面,此種現象在文心、石斛、萬代及蝴蝶 蘭均有發現,因此常被栽培者誤認為真菌感染所致。部份感染CyMV之蘭屬如虎頭蘭、報歲蘭、文心蘭及蝴蝶蘭也會產生黃綠斑駁之嵌紋 (mosaic) 或黃化條斑型 (chlorotic streak) 病徵。人工栽培之蘭園中 CyMV 與 ORSV 複合感染同一蘭株之現象極為普遍,對蘭株之影響有加成效果 (synergistic effect),病徵會遠比單獨感染時嚴重許多。另外也有部份蘭花種類感染後並不表現任何可辨識病徵。 •病原菌: | 分 類: | CyMV 乃馬鈴薯X群病毒 (Potexviruses) 之一員。純化之 CyMV 病毒顆粒抗原性極強 (strong immunogen),經免疫注射後可產生高力價抗血清,且專一性相當高,與其同源抗原 (homologous antigen) 反應極強。根據文獻報告 Potexviruses 病毒群中只有 Potato virus X (PVX) 與 CyMV 有部份之血緣關係,而CyMV 是唯一發生於蘭科植物之 Potexviruses,因此在鑑定或檢定上並不會發生太大困擾。 | | 分 佈: | CyMV 被認為是全球各地人工栽培蘭株上發生最普遍之病毒,根據 Zettler 等之報告,共有包括嘉德麗亞蘭及蝴蝶蘭等 30 種蘭屬植物曾經被紀錄可以被 CyMV 感染,而且均屬人工栽培一段時間之蘭株,彼等並發現在這些蘭屬之 639 株野生蘭株中未有任何病毒感染之情形,顯見病毒之感染與人工栽培有密切關係。 | | 寄 主: | 雖然利用人工接種之方式 CyMV 也可以感染 Chenopodium amaranticolor、Datura stramonium 及 Cassia occidentalis 形成局部病斑,但是其天然寄主仍以蘭科植物為主。 | | 形 態: | CyMV之病毒形態為絲狀易彎曲顆粒,長度 415-475nm,寬度 13-18nm。 | | 傳播方式: | 主要藉機械性傷口傳染,未發現有任何昆蟲可以媒介此病毒,蘭園中可經由病株汁液、工具、栽植過病株之盆缽、重複使用之植材、蘭株間之直接接觸,甚至灌溉水傳播此病毒。另外近年來蘭花種苗生產常用之分生組織培養,也是傳播此病毒之一項極普遍而有效之途徑。 | | 理化性質: | CyMV 之理化性質中已知的包括:活體外 (in vitro) 耐熱度 65-70℃;於室溫下病毒可維持活性至少 7 天以上;RNA 含量 6%。鞘蛋白單位分子量 27.5 KDa;吸光度 260/280 比值 1.16。 | | 診斷技術: | 利用觀察病徵方式進行 CyMV 之診斷,在少數被感染後可以穩定出現典型病徵之蘭花種類上是可行的,但對於大多數蘭種而言,被 CyMV 感染後所表現之病徵並不穩定,因此,只依據病徵診斷並不可靠。事實上蘭花感染病毒後常須一段時日才會表現病徵,此一病徵潛伏期之長短,隨蘭花種類及其生長狀態而有不同,有些蘭種甚至根本不出現病徵。若仰賴病徵之表現作為判別感染之唯一依據,則與事實會有相當之出入。延遲或錯誤之診斷常會導致病毒之擴大流行,故應配合其他更敏感之方法進行診斷方為上策。過去曾經被應用於 CyMV 診斷之方法包括: | | | 1. | 指示植物接種法: 可利用之指示植物包括 Cassia occidentalis、C. amaranticolor、C. quinoa、Tetragonia expensa 及 Datura stramonium 等。然而影響接種成功與否的因素很多,除非操作者經驗豐富,否則誤診之機會仍然很大。而且若以此作為例行之檢定方法則必需有設備良好、空間足夠的溫室與維護管理之人工。 | | | 2. | 電子顯微鏡觀察法: 此乃以觀察病株有否CyMV之典型病毒顆粒作為判別之依據。另外配合專一性抗體之應用 (如 Immuno-specific electron microscopy, ISEM) 也能提升電顯觀察之敏感度。 | | | 3. | 光學顯微鏡觀察法: 此乃根據 Christie and Edwardson (1977) 所發展之技術,利用染色法觀察病毒於寄主細胞內所形成之內含體 (inclusion body) ,根據報告 CyMV 於寄主細胞質中產生帶狀內含體 (banded body),作為判別之依據。 | | | 4. | 抗血清檢定法: 此乃目前各種檢查法中應用最普遍的一種。常用之血清檢定法包括免疫擴散法 (SDS-immunodiffusion test)、酵聯抗體法 (ELISA) 及免疫點漬法 (immunoblotting test) 等三種。 | | | 5. | 核酸檢查法: 以病毒核酸為檢測對象,常用方法包括核酸探針雜配法 (DNA probe hybridization),及晚近生物技術上所廣泛應用之聚合酵素連鎖反應 (polymerase chain reaction, 簡稱 PCR) 均可適用於 CyMV 之檢定。 |
•發生生態: 有報告指出,在野生蘭株中未發現有任何病毒感染之情形,因此該作者推測蘭花病毒之發生與人工栽培有密切關係。到底最初蘭花病毒從何而來已無法追究,但此病毒廣泛存在全世界各地蘭園,確是無法否認之事實,顯示 CyMV 之普遍發生與人工栽培時所採取的無性繁殖方式有絕對之關係。其次 CyMV 是一種性質極為穩定之病毒,在離開寄主細胞後,雖無法繁殖其個體,但仍可存活相當時日,人工栽培蘭花時所採取之任何可以造成機械性傷口之機會,均可導致病毒之傳播,加上近年來蘭花產業逐漸規模化以後,為了達到快速繁殖種苗所採用之組織培養技術,更加速病毒之全面蔓延,而世界上各地區之貿易交流及有效率之運輸網路,更是蘭花病毒全球分佈之主要因素。當然近百年來當蘭花逐漸由貴族式之栽培模式轉變成平民化之花卉時,在快速量化之過程中,人們對於病毒檢疫之忽視也是造成蘭花病毒廣泛分佈之另一項重要原因。 •防治方法: | 一、 | 栽植無病毒苗。收集外來品種時,引入前須先經病毒檢定確定無毒者,再引入種植。 | | 二、 | 就可疑帶毒植株進行病毒檢定,確定帶毒者立即銷燬植株、植材及盆缽。 | | 三、 | 養成栽培過程中避免造成任何植株受傷之習慣。例如澆水時避免過度激烈沖刷,以減少植株間葉片磨擦受傷之機會。 | | 四、 | 避免重複使用未經處理之植材及盆缽。 | | 五、 | 避免過度密植,以減少植株間機械磨擦受傷之機會;避免立體式栽植,或使溉溉水有在不同植株上相互流通之機會。 | | 六、 | 分生組織培養前母株須經病毒檢定。 | | 七、 | 移植苗木時避免在同一容器內一起浸藥。 | | 八、 | 切花或操作用工具必須消毒。常用之消毒方法有如下幾種: | | | 1. | 乾熱消毒法:利用烘箱在 180℃ 至少維持 1 小時。 | | | 2. | 濕熱消毒法:浸於沸水中至少 15 分鐘。 | | | 3. | 火焰消毒法:將工具上接觸過植物汁液之部位以火焰燒 10-20 秒。 | | | 4. | 化學藥品消毒法:以 5% 氫氧化納或 3-10% 磷酸三鈉溶液浸泡至少 1 分鐘。 | | | 5. | 牛奶消毒法:鮮奶浸泡後可立即使用,但是對 ORSV 病毒無效。 |
 | |  | | 感染CyMV之蝴蝶蘭葉片背面出現褐色壞疽斑塊 | | 複合感染ORSV及CyMV之蝴蝶蘭葉片出現較單獨感染嚴重之大型壞疽及黃花斑塊 |  | |  | | 病毒感染造成系統性的褪色斑塊(黃德昌提供) | | 報歲蘭感染病毒之狀況 |
齒舌蘭輪斑病毒 (Odontoglossum ringspot virus) ▲TOP •簡稱:ORSV •病徵: 根據報告可以被 ORSV 感染之蘭花種類超過 20 個屬以上,不同之蘭屬或種所產生之病徵時有差異。ORSV 最早在Odontoglossum grande 上被發現時所紀錄之病徵是輪斑 (ringspot),另外嵌紋 (mosaic)、斑紋(mottle)、黃化條紋 (chlorotic streak)、花色條斑 (breaking) 甚至壞疽型 (necrosis) 病徵均有記錄。亦有部份蘭花種類感染 ORSV 後並不表現病徵,此現象在臺灣地區重要之蝴蝶蘭及文心蘭上均常發現。另外 ORSV與 CyMV 複合感染同一株蘭花後,促使病徵加重之現象在上述兩種蘭花上極為普遍。 •病原菌: | 分 類: | ORSV屬煙草嵌紋病毒屬 (Tobamovirus)。過去部份文獻認為 ORSV 應為煙草嵌紋病毒 (Tobacco mosaic virus, TMV) 之蘭花系統 (TMV-O),但也有相當多之學者證實 ORSV 為獨立之 Tobamovirus 而非屬於 TMV 之一系統 (Edwardson and Zettler, 1988)。最近日本學者 Isomura 等更提出核酸序列分析之證據,支持 ORSV 乃異於TMV之獨立病毒。不過至今學界仍無法排除確有不同於 ORSV 之 TMV 系統可以感染蘭花之可能,此有待來日學者之繼續努力方能闡明。不過 ORSV 為異於TMV之一種發生於蘭花上最普遍之 Tobamovirus 應屬學界目前普遍認同之事實。 | | 分 佈: | ORSV 最早是由 Jensen & Gold 於 1951 年在美國 Odontoglossum grande 上所發現。其後有關之報導持續不斷,目前與 CyMV 並列為蘭花上發生最普遍之病毒。據判斷其分佈應已遍及全世界各地商業生產之蘭園。 | | 寄 主: | 自然界寄主以蘭科植物為主,至少有 20 種蘭屬被證實可以被 ORSV 感染。可經由人工接種方式受感染之寄主包括Chenopodium amaranticolor、C. quinoa、Zinnia elegans、Nicotiana benthamiana、N. glutinosa、N. tabacum cv. Samsum、N. tabacum cv. Xanthi-nc、N. clevelandii、Cassia occidentalis、Tetragonia expensa、 Gomphrena globosa 及 Beta vulgaris 等。 | | 形 態: | ORSV 之病毒形態為典型 Tobamovirus 之直硬桿狀顆粒,長度 300nm,寬度 18nm,顆粒中軸可清楚分辨有溝狀構造。 | | 傳播方式: | 傳播方式與CyMV相同。 | | 理化性質: | ORSV 已知的之理化性質包括:活體外 (in vitro) 耐熱度 90-95℃;耐稀釋性達 10-7 以上;耐保存性最長之記錄超過 10 年以上 (Inouye, 1983);RNA含量 5%。鞘蛋白單位分子量 17,598 Da;純化顆粒之最高吸光值位於 268 nm,最低值位於 248 nm;正常形態之病毒顆粒沉降係數為 212 S,吸光度 260/280 比值 0.99;buoyant density in CsCl 為 1.25 g cm-3。 | | 診斷技術: | 根據病徵表現進行 ORSV 之診斷是蘭園中最普遍使用之方法,但其正確性常因蘭花品種對病毒感受性之差異或處於潛伏期而受影響,故其診斷與 CyMV 相同,應配合其他較敏感方法為佳。可應用於 ORSV 診斷之方法包括指示植物接種法;最常用之 ORSV 指示植物有 Gomphrena globosa、Nicotiana tabacum cv. Samsum 及 N. benthamiana 等。不過影響人工接種結果的因素很多,操作者必須具備豐富經驗,否則導致誤診之機會很大,而且由於時效之限制,無法處理大量樣品也是應用此一診斷方式之限制。其次應用電子顯微鏡檢查病株是否有 ORSV 之典型短桿狀顆粒,亦為常用可行之方法,若再配合 ORSV 抗體之應用,可進一步提升電顯觀察之敏感度。另外近年來所發展之光學顯微鏡檢查法,可依據 ORSV 於寄主細胞質內所形成之特殊圓盤形或紡錘形結晶狀內含體 (crystalline inclusion) 作為判別之依據。事實上近年來應用在 ORSV 之診斷上最普遍之方法是抗血清檢定法,特別是酵聯抗體法 (ELISA) 及免疫點漬法 ( immunoblotting test ) 最為產業界所接受。此外90年代逐漸廣為應用之核酸檢查法,如核酸探針雜配法 (DNA probe hybridization) 及聚合酵素連鎖反應(PCR),亦已被發展成為例行之 ORSV 診斷方法。此類方法雖較抗血清法敏感,但技術門檻及經濟成本也相對較高,全面取代較為便捷之抗血清法在現階段仍不可能,但可應用於少量珍貴種源之病毒篩檢工作上。三、發生生態ORSV 之發生生態與前述 CyMV 相同,唯 ORSV 之生體外性質較 CyMV 穩定,可於污染之器具或植材上存活更久之時間,因此防治上比對付 CyMV 更為棘手,已發生 ORSV 之蘭園應更加注意避免病毒蔓延。 |
•發生生態: ORSV之發生生態與前述CyMV 相同,唯ORSV 之生體外性質較CyMV 穩定,可於污染之器具或植材上存活更久之時間,因此防治上比對付CyMV 更為棘手,已發生ORSV 之蘭園應更加注意避免病毒蔓延。 •防治方法: 防治管理方法同 CyMV 者,但消毒處理工具時因 ORSV 之性質更為穩定,牛奶消毒無效,應避免使用。 胡瓜嵌紋病毒 (Cucumber mosaic virus) ▲TOP•簡稱:CMV •病徵: CMV 感染蘭花之例子並不多,本省僅在蝴蝶蘭上曾經有報告。主要病徵為葉部產生黃化條紋或全葉黃化,另外對於紅色系品種之花瓣上會產生褪色條斑。 •病原菌: | 分 類: | CMV之分類地位過去自成一群 (Cucumoviruses ),但 1995 年後經第六次國際病毒分類委員會重新將其歸類於 Bromoviridae中四個屬之一屬,稱為 Cucumovirus。此病毒顆粒為球形多面體,直徑約 28 nm,基因體由四段大小不等之RNA 組成,其中 RNA4 為 RNA3 之次基因體核酸 (subgenomic RNA),僅帶有鞘蛋白訊息。此屬病毒只含有三個種 (Cucumber mosaic virus、Tomato aspermy virus 及 Peanut stunt virus),種間之各病毒間均具血緣關係。 | | 分 佈: | CMV 可感染為數極多之經濟作物種類,其分布遍及全球各地。 | | 寄 主: | CMV 之寄主範圍極為寬廣。可危害多數經濟作物,涵蓋單子葉及雙子葉植物,舉凡瓜類之胡瓜、絲瓜、西瓜、洋香瓜、甜瓜,茄科作物之番茄、甜椒、辣椒、煙草,果樹類之百香果、香蕉以及種類繁多之觀賞花卉植物如唐菖蒲、金花石蒜、百合等,另外CMV也可感染為數極多之野生植物。 | | 形 態: | 病毒形態為球形多面體,直徑 28-30 nm。顆粒體對中性氯鹽 (neutral chloride salts) 及陰離子界面活性劑 (anionic detergents) 頗為敏感,經處理後極易崩解。 | | 傳播方式: | CMV 可藉汁液傳染,亦可由蚜蟲以非永續方式 (non-persistent) 傳播,可傳播 CMV 之蚜蟲種類超過 60 種以上。CMV 不會經由蘭花種子帶毒傳播,但至少有 19 種植物感染後種子有傳播 CMV 現象。 | | 理化性質: | CMV 之病毒顆粒乃由 180 個分子量為 24-26 kDa 之基本單位鞘蛋白 (subunit capsid protein) 包被單鏈型核糖核酸 (single stranded RNA)所組成,RNA含量為18%,病毒顆粒之沉降係數為 100 S,buoyant density in CsCl 為 1.37 gcm-3,Mr 為 6×106。CMV 之核酸乃由三條基因體 (RNA 1-3)及一條次基因體 (subgenomic RNA 4) 具轉譯訊息之線性單鏈型核糖核酸所組成,RNA 1 (3.41 kb) 及RNA 2 (3.06 kb)乃分別包被於不同病毒顆粒內,而 RNA 3 (2.19 kb) 及 RNA 4 (1.03 kb) 則共同包被於第三種顆粒內。 A260/280 約為1.7,Extinction coefficient (at 260 nm) 為 5.0。CMV 之生體外耐熱度為 70℃。 | | 診斷技術: | CMV 感染蝴蝶蘭及石斛蘭所造成之黃化條斑型病徵與 CyMV 者頗為類似,因此僅根據病徵作為 CMV 之診斷依據並不可靠。較理想之 CMV 診斷方法乃應用抗血清之免疫檢定法,包括 ELISA,SDS- immuno diffusion test 均可適用。另外近年來所發展之 RT-PCR 及核酸探針雜配法亦可應用於 CMV 之檢測。 |
•發生生態: CMV 在蘭花上之發生生態與 CyMV 及 ORSV 絕然不同。CMV 主要應該來自於蘭園周圍之其他感病作物再經由蚜蟲以非永續方式 (non-persistent) 媒介傳入蘭花。可傳播 CMV 之蚜蟲種類超過 60 種以上,加上 CMV 之寄主範圍廣泛,因此在本省秋冬之蚜蟲族群高峰季節CMV之傳播極為普遍。若蘭花栽培在開放空間下則被 CMV 感染之機會並非沒有,所幸本省目前蝴蝶蘭均栽培於密閉式溫室或網室,除非種苗組織培養生產過程中母本為帶毒者,否則 CMV 大舉發生之機會不高。 •防治方法: 防治 CMV 所使用之方法與對策同 ORSV 及 CyMV 者。 •參考文獻: | 1. | 張清安。1994。蘭花病毒病之特性與防治。蘭花經濟栽培技術。129-148 頁。賴本智等主編。行政院青年輔導委員會創業輔導叢書三-17。行政院青年輔導委員會出版。 | | 2. | 張清安。1996。植物病毒鑑定及診斷新技術。植物保護新科技研討會專刊。35-45頁。臺灣省農業試驗所特刊第57號。臺灣省農業試驗所編印。 | | 3. | 張清安、陳金枝。1997。應用RT-PCR 檢定技術偵測二種重要蘭花病毒之開發研究。125頁。八十五年度臺灣農業試驗研究成果年報。臺灣省政府農林廳編印。 | | 4. | 張清安。 1991。蘭花病毒病害。農民推廣專刊。40頁。張清安編著。行政院農業委員會及臺灣省政府農林廳補助出版。 | | 5. | 張清安。1994。臺灣花卉病毒病害。213-224頁。臺灣花卉病蟲害研討會專刊。中華植物保護學會特刊新二號。 | | 6. | 陳金枝、張清安、林玫珠、方懷聖。2000。胡瓜嵌紋病毒感染引起的港口馬兜鈴嵌紋病之鑑定。植物病理學會刊 9:29-34. | | 7. | 柯南靖。1989。簡易植物病毒診斷圖鑑。109頁。柯南靖編著。臺灣省政府農林廳補助出版。 | | 8. | 動植物防疫檢疫局,2000,植物保護圖鑑系列6,第59-74頁 | | 9. | Chang, C. A., and Pang, J. H. 1990. Preparation of antisera against Cymbidium mosaic virus and Odontoglossum ringspot virus and their uses in serological indexing for orchid industry in Taiwan. Plant Prot. Bul. 32:336. | | 10. | Hollings, M., and Stone, O. M. 1977. Cymbidium rinspot virus. CMI/AAB. Description of Plant Viruses, No. 178. | | 11. | Hsu, H. T., Vongsasitorn, D., and Lawson R. H. 1992. An improved method for serological detection of Cymbidium mosaic potexvirus infection in orchids. Phytopathoplogy 82:491-495. | | 12. | Lawson, R. H., and Hsu, H. T. 1995. Orchid. p.409-420. In: Virus and Virus-like Diseases of Bulb and Flower Crops. Loebenstein et. al. (eds.), John Wiley & Sons, West Sussex, United Kingdom, 543 pp. | | 13. | Zettler, F. W., Ko, N. J., Wisler, G. C., Elliott, M. S., and Wong, S. M. 1990. Viruses of orchids and their control. Plant Disease 74:621-625. | | 14. | Isomura, Y., Matumoto, Y., Murayama, A., Chatani, M., Inouye, N., and Ikegami, M. 1991. Molecular cloning, sequencing and expression in Escherichia coli of the Odontoglossum ringspot virus virus coat protein gene. J. of Gen. Virol. 72:2247-2249. | | 15. | Jensen, D. D., and Gold, H. A. 1951. A virus ring spot of Odontoglossum orchid: symptoms, transmission and electron microscopy. Phytopathology 41:648-653. | | 16. | Paul, H. L. 1975. Odontoglossum ringspot virus. CMI/AAB. Description of Plant Viruses, No. 155. | | 17. | Edwardson J. R., and Zettler, F. W. 1988. Odontoglossum ringspot virus. p.233-247. In: The Plant Viruses. Vol. 2. Van Regenmortel, M.H.V., and Fraenkel-Conrat, H. (eds.), Plenum Publishing Corperation, New York, USA. | | 18. | Francki, R. I. B., Mossop, D. W., Hatta, T. 1979. Cucumber mosaic virus. CMI/AAB Description of Plant Viruses, No. 213. | | 19. | Inouye, N., and Leu, L. S. 1983. Survey on the viruses in orchids in Taiwan. Nogaku Kenkyu 60:91-110. |
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